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動態(tài)濁度法鱟試劑操作方法如下:

發(fā)布時間: 2022-08-09  點擊次數(shù): 4429次
  動態(tài)濁度法鱟試劑是通過檢測反應混合物的濁度到達某一預先設(shè)定的吸光度所需要的反應時間,或是檢測濁度增加速度來檢測內(nèi)毒素的方法。在適宜的條件下(溫度,pH值及無干擾物質(zhì)),細菌內(nèi)毒素激活C因子,引起一系列酶促反應,使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應形成凝膠。隨著凝膠的形成,反應液的吸光度(OD值,濁度)增加,OD值增加的速度與內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)。換言之,OD值上升某一預設(shè)限值(啟動OD)所需要的時間(定義為啟動時間)與內(nèi)毒素濃度成負相關(guān),啟動時間的對數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對數(shù)成線性關(guān)系,據(jù)此,可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。
  
 

動態(tài)濁度法鱟試劑
 

 

  動態(tài)濁度法鱟試劑操作方法如下:
  
  1、動態(tài)光度測定儀器的設(shè)定:
  
  預熱儀器,設(shè)置溫育溫度為37℃,設(shè)置模板及程序。設(shè)定讀板波長為340nm、630nm,設(shè)定動力學參數(shù):讀板90-120分鐘,每讀板間隔30-150s。
  
  2、內(nèi)毒素標準溶液配制
  
 ?。?)標準曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為2至10倍稀釋的系列(如0.5,0.25,0.125,0.0625EU/mL或10,1,0.1,0.01EU/mL))。
  
 ?。?)取內(nèi)毒素工作標準品1支,用砂輪沿安瓿頸部劃痕,開啟,加入適量(建議在0.5mL-1.2mL之間)細菌內(nèi)毒素檢查用水,置旋渦混合器上劇烈振搖5分鐘。
  
 ?。?)將上述內(nèi)毒素溶液進一步用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成所需濃度,每稀釋一步均應在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘。稀釋的內(nèi)毒素溶液靜置時間超過10分鐘,用前在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘,配置時間超過4小時的內(nèi)毒素溶液應丟棄。
  
  3、陰性對照為細菌內(nèi)毒素檢查用水。
  
  4、動態(tài)濁度法鱟試劑的溶解:按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中,輕輕振搖使鱟試劑*溶解。注意不要用旋渦混合器劇烈振搖。溶解的鱟試劑應在10分鐘內(nèi)使用。若采用多道移液器,將溶解的鱟試劑轉(zhuǎn)移到除熱原加樣槽,并輕輕搖勻。
  
  5、實驗操作:
  
 ?。?)取除熱原微板,在各孔中分別加入100μL細菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標準溶液,或供試品。
  
 ?。?)將微板放置于鱟試儀中,37℃溫育10分鐘。
  
 ?。?)溫育結(jié)束,用移液器或多道移液器加入100μL鱟試劑(避免產(chǎn)生氣泡!),中速振搖10秒混勻,在340nm波長處,每30秒(到60秒)讀一次,讀板120分鐘。
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