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細(xì)菌內(nèi)毒素中臨床樣品測(cè)定值的影響因素

發(fā)布時(shí)間: 2022-12-08  點(diǎn)擊次數(shù): 899次

1、對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素活性影響

我們知道,樣品中鐵、鋁等離子能夠引起細(xì)菌內(nèi)毒素活性的降低,當(dāng)我們?cè)趦?nèi)毒素溶液中只需加入0. 04mM的鐵0. 02mM的鋁,就可引起內(nèi)毒素活性下降30%左右,另外其他金屬離子如Mg2+、Ga2+等也有這種影響。雖然這種情況對(duì)于臨床樣品測(cè)定影響不大但是我們?cè)谑褂脙?nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋過(guò)程及測(cè)定時(shí)要引起注意。

  

2、測(cè)定方法的影響

前面我們已經(jīng)介紹,在眾多試驗(yàn)法中,作為臨床體外診斷試劑許可的常用內(nèi)毒素測(cè)定法主要是微量定量的比濁時(shí)間分析法和合成基質(zhì)法兩種。

 

1.比濁時(shí)間分析法

系根據(jù)LAL/TAL試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)所形成的濁度變化作為指標(biāo)的種手段,因此它很容易受到樣品中的濁度影響。但是我們知道測(cè)定中沒(méi)有絕對(duì)的濁度值,由于是以變化率作為指標(biāo),因此在有濁度的樣品中進(jìn)行測(cè)定時(shí),反應(yīng)過(guò)程中不受沒(méi)有非特異性濁度變化的情況是不可能的,另外,使用表面活性劑的稀釋加熱法,可使測(cè)定過(guò)程中的非特異濁度變化減輕。今后,人們期待著開(kāi)發(fā)能夠避免非特異濁度變化影響的前處理方法和測(cè)定方法。

 

2.合成基質(zhì)法

是以LAL/TAL試劑凝固酶肽合成基質(zhì)水解作為指標(biāo)和分析方法,分為終點(diǎn)比色法和動(dòng)態(tài)比色法。在終點(diǎn)比色法中,由于測(cè)定分離PNA的對(duì)銷(xiāo)基苯胺的黃色(405nm)或偶氮化后的紅色(545nm),因此要注意膽紅素等黃色物質(zhì)共存的影響以及各種磺胺類(lèi)制備對(duì)紅色的假陽(yáng)性影響。

 

3.血漿成分的影響

血漿中的抗凝血酶,a2纖維蛋白溶酶抑制劑等對(duì)LAL試劑中的凝固酶存在干擾作用,為了去除這些影響,人們開(kāi)發(fā)出了各種前處理方法。另外血中還存在著對(duì)測(cè)定產(chǎn)生影響的各種各樣內(nèi)毒素結(jié)合物質(zhì)甘油三酯核糖蛋白,高密度核糖蛋白(HDL)及低密度核糖蛋白(LDL)LBP、BPI這些物質(zhì)也會(huì)干擾試驗(yàn)測(cè)定。這些物質(zhì)的影響可以考慮為對(duì)內(nèi)毒素活性干擾作用。這些物質(zhì)在反應(yīng)液中存在時(shí)就有可能抑制內(nèi)毒素的活性,但是在使用酸處理或加熱處理測(cè)定血中的內(nèi)毒素時(shí),這些蛋白性的內(nèi)毒素結(jié)合物質(zhì)變性的可能性很強(qiáng)。因此,我們?cè)跍y(cè)定時(shí)要引起注意。

  

4.我國(guó)發(fā)展現(xiàn)狀

到目前為止,國(guó)外對(duì)于血中的微量細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定一般均采用定量的動(dòng)態(tài)比濁法和比色法,用于臨床的診斷及研究也十分普遍,而且均具有專門(mén)的試劑盒。國(guó)內(nèi)由于在定量方法上的研究起步較晚,加之定量比色試劑也剛剛開(kāi)發(fā)出來(lái)因此在臨床上的研究還剛剛開(kāi)始。雖然有一些單位一直進(jìn)行這方面的檢驗(yàn)工作,但幾乎都是使用半定量凝膠法,加之血液前處理方法的使用也各不相同因此各個(gè)單位之間數(shù)據(jù)參差不齊,無(wú)法比較。故建立標(biāo)準(zhǔn)化前處理方法以及測(cè)定方法才能準(zhǔn)確檢測(cè)血中內(nèi)毒素,為臨床的早期診斷提供理論依據(jù)。

 

相信在不遠(yuǎn)的將來(lái),內(nèi)毒素的含量測(cè)定將在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域得到快速發(fā)展和應(yīng)用。


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